Tecnopica.com

Medio de cultivo para semillas de Orquideas Invitro -(I)

julio 7, 2018

Esta tarde toca preparar medio de cultivo, envasar y esterilizar la mezcla. Quizás, esta parte del proyecto tiene un punto adicional de diversión y entretenimiento…

Medio de cultivo F01

Además de la satisfacción que nos pueda crear, al menos a mi me ocurre,  y creo que es por la relación que guarda con la “cocina”, esta es la parte mas amena del proceso. No en vano, esta mezcla que prepararemos será el sustento que alimente a nuestras semillas en los próximos días, semana, incluso meses, varios meses si todo va bien.

Para preparar el medio de cultivo idóneo, existen varias formulas documentadas que fácilmente podemos encontrar por la red y seguir sin demasiadas complicaciones, con productos caseros mas o menos complicados de obtener.

En el foro InfoJardin, también tenemos varios hilos que tratan sobre este aspecto del medio de cultivo

Os pongo tambien este enlace del blog de Monstera, donde encontrareis detalle de varias formulas y otras cosas interesantes relacionadas con el InVitro, que a mi me han servido de guia.

Al pie de este articulo os dejo también algunos enlaces interesantes sobre este proceso, materiales y compuestos.




En mi caso, para la formula del medio de cultivo, elegí una mezcla que está de moda últimamente entre los aficionados al mundo invitro de la siembra de semillas, especialmente de orquideas, aunque también usada para otras semillas y esquejes, y que a decir por las experiencias que se comentan, es una mezcla que da muy buenos resultados.

Por mi parte, a titulo de experimento, pruebas y divulgación, use algunas variantes a esta formula  y de todo ello, os comento a continuación lo mas destacado.

Para la fabricación de este medio de cultivo vamos a necesitar algunos ingredientes, todos fáciles de encontrar, aunque algunos de ellos no están disponible en el super o en el bazar y tendremos que recurrir a la compra Online mediante alguna tienda especializada o laboratorio.

  • Agua Destilada

  • Agua de coco natural

  • Azúcar

  • Medio MS 105 (Murashige & Skoog Basic Medium)

  • Carbón vegetal natural (sin aditivos)

  • Agar Agar Culinario en fibras

 

 

Necesitaremos tener preparados algunos tarros limpios e higienizados, asi como algunos envases para contenedor de compuestos, medidores y útiles para pesar, yo use balanza de precisión y papel de aluminio para pesar y transportar los ingredientes, aunque tenia preparado algunos recipientes con etiquetas que finalmente solo use para el agar.

Un vaso para la mezcla con capacidad al menos de 500 ml es fundamental,  o de mas contenido, en función de la cantidad de medio a preparar,  un vaso medidor para el agua de coco y otro para el agua destilada.

MEDIOS DE CULTIVOS EXPERIMENTADOS​​ 

COMPUESTO

Por orden de mezclado

Formula Origen

½ Dosificación

Variante 1

Variante 2

Variante 3

Variante 4

Aguas destilada

1000 ml

500 ml

500 ml

500 ml

500 ml

500 ml

Sacarosa

20 g

10 g

10 g

10 g

10 g

10 g

Medio MS​​ 

2,21 g

1,105 g

1,105 g

1,105 g

1,105 g

1,105 g

Carbón Vegetal​​ (Opcional)

 

 

1 g

 

1 g

 

Carbón Activado

2 g

1 g

 

1 g

 

1 g

Agua de coco Filtrada

100 ml

50 ml

50 ml

50 ml

50 ml

50 ml

Ajustar PH medio a:

5.70

5.70

5.70

5.70

5.70

5.70

Agar Culinario opcional)

 

 

5 g

5 g

 

 

Agar Bacteriológico

6 g

3 g

 

 

3 g

4 g

 

 

 

 

 

 

 

 

Formula Origen:​​ Dosificación original.

½ Dosificación:​​ Dosificación original reducida al 50%

Variante 1:​​ Dosificación modificada. 50% original. Uso de carbón vegetal común y​​ agar​​ culinario.

Difícil ajuste de ph. Mala disolución de estos compuestos. Restos e impurezas flotan ​​ en la mezcla. Decantación. Gelatinización en diferentes ​​ texturas para la misma medida ​​ ​​ según el tipo de agar.

Variante 2:​​ Dosificación​​ modificada. 50% original. Uso de carbón activado y​​ agar ​​ culinario. Sencillo ajuste de ph, Mejor disolución de estos compuestos. Limpio de impurezas en la mezcla. Algunos restos. Decantación. Gelatinización en diferentes texturas para la misma medida  ​​​​ según el tipo de agar.

Variante 3:​​ Dosificación modificada. 50% original. Uso de carbón vegetal común y​​ agar​​ bacteriológico.

Difícil ajuste de ph. Mala disolución de estos compuestos. Restos e impurezas flotan ​​ en la mezcla. Decantación. Gelatinización en diferentes ​​ texturas para la misma medida ​​​​ según el tipo de agar

Variante 4:​​ Dosificación modificada. 50% original. Uso de carbón activado y​​ agar​​ ​​ bacteriológico.​​ 

Perfecto ajuste de ph. Buena disolución de estos compuestos. Sin restos ni impurezas. ​​ Sin decantación. Gelatinización en diferentes consistencias según gramos: 2,5 g a 4 g​​ para 1 litro de agua.

 

Una vez que tengamos mezclados todos los ingredientes en las proporciones descritas, menos el agar-agar, tendremos que comprobar el ph del medio fabricado, que debe estar en torno a 5.7, como referencia para un ph optimo.

En la composición de la variante 1 de mi formula, la utilizada en el video, el ph lo tendremos de media en torno al 7, que es aproximadamente el ph del agua destilada y dependiendo del tipo de carbon vegetal que usemos tendrá algún punto decimal alcalino mas o menos.

Para calibrar el ph de nuestra mezcla podemos usar estos dos compuesto que os indico a continuación, tanto para bajar el ph, caso que será el mas normal, o para subirlo, esto en el supuesto de que no acertemos bien a bajarlo y nos pasemos a demasiado acido. En el video podréis ver un ejemplo y como proceder.

Acido para bajar el ph:

Productos toxicos

Productos tóxicos – Acido corrosivo

  • El ácido clorhídrico, ácido muriático, espíritu de sal, ácido marino, ácido de sal o todavía ocasionalmente llamado, ácido hidroclórico (traducción del inglés hydrochloric acid), agua fuerte o salfumán (en España), es una disolución acuosa del gas cloruro de hidrógeno (HCl).
  • Se aplica gota a gota sobre la mezcla de medio, en la misma proporción como viene envasado en las opciones comerciales a la venta, sin diluir, envasar en cuentagotas. Aplicar gota a gota. Remover el medio después de cada gota y comprobar ph.
  • Se deben observar algunas medidas de protección y cuidado, tratamos con un liquido acido altamente corrosivo que puede provocar lesiones graves.  Precaución.

 

Base para subir el ph:

  • El bicarbonato de sodio (también llamado bicarbonato sódico, hidrogenocarbonato de sodio, carbonato ácido de sodio o bicarbonato de soda) es un compuesto sólido cristalino de color blanco soluble en agua, con un ligero sabor alcalino parecido al del carbonato de sodio (aunque menos fuerte y más salado que este último), de fórmula NaHCO3.
  • Se aplica gota a gota sobre la mezcla de medio, en la proporción de una cucharilla rasa de café disuelta en 100 ml de agua destilada, agitar, disolver y envasar en cuentagotas. Aplicar gota a gota.Remover el medio después de cada gota y comprobar ph.

Para las comprobaciones del ph cuando estemos ajustándolo, como opción económica,  podéis usar las tiras reactivas de papel, van bien y son fáciles para la comprobación mediante la observación de la escala de colores, después de ser sumergidas en el medio,  y su numeración.

Es un método un poco mas complicado que si usamos un medidor digital para saber si estamos cerca del valor que deseamos, en nuestro caso 5.7, pero si se parece al color del numero 6 o algo por debajo, prácticamente es el color de la tira sin mojar, entonces estaremos bien en el ajuste o muy cerca.

Papel reactivo ph

Papel reactivo ph comprobación

Una vez terminado de ajustar el ph del medio a 5.7 llega el momento de añadir el agar culinario en fibra a la mezcla, cortado o picado.

Hidratar durante unos minutos en el liquido, calentar al microondas sin hervir, agitar y volver a calentar varias veces hasta que veamos que se ha disuelto por completo. Podéis usar algún tipo de batidora para este propósito si la disolución no se hace correctamente.

En ese momento tendremos el medio listo para envasar en los tarros que previamente hemos preparado, lavado e higienizado. La mejor opción es preparar los tarros con el medio, antes de que se enfrié y esterilizarlos después en olla a presion, esto lo dejaremos para el próximo articulo en el que incluiremos también un video.

Para la cantidad de medio fabricada, 500 ml, nos dan para un minimo de 10 tarros, a 50 ml por tarro. Esta cantidad se puede reducir y sacar mas tarros, con 20 o 30 ml es suficiente, mas o menos un centímetro a centímetro y medio de fondo, dependiendo del tarro.

La cantidad sobrante si se fabrica mas cantidad se puede conservar durante algún tiempo:

  • En otros tarros higienizados, procesado en olla a presión, medio  esterilizado, mínimo 6 meses, aunque puede perder propiedades con el paso del tiempo, siendo aun viables para un nuevo plantado o repique.
  • En congelador, mas de 6 meses en buenas condiciones de envasado a -21º.

Seguiremos con la esterilización del medio en el próximo articulo, ahora os dejo el video.

Video:

 


Para ver el video de la parte 2, sigue este enlace 


Enlaces de Interés:

Foro InfoJardin

Blog de Monstera

Canal de Isaac Reyes Vitroplantas

MedioMS para 1L


Si tienes alguna duda sobre Orquídeas, deja un comentario, te ayudaremos lo antes posible y recuerda suscribirte al boletín y a nuestro canal en Youtube: Suscribe

También puedes consultar la sección de FAQS – Preguntas Frecuentes , esperamos poder ayudarte.

Gracias por ayudarnos a compartir este contenido...

Un comentario

  • Andres H. julio 8, 2018en8:22 am

    Gracias por esta información, me ha sido muy útil, y por favor, síguenos informando

Deja un comentario