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Medio de cultivo para semillas de Orquideas Invitro -(IV)

julio 28, 2018
Medio de cultivo 2-2

Medio de cultivo 2-2

Vamos a esterilizar el medio de cultivo, quizás el paso mas importante en todo este proceso, ya que de una buena o mala preparación y sobre todo esterilizacion del mismo, dependerá el éxito o el fracaso rotundo de todo el proyecto. Hemos mencionado en otras ocasiones la importancia de este paso, y hemos documentado gráficamente la forma de hacerlo, al menos la forma en que aprendí a hacerlo.

Gracias a los aficionados y entusiastas de estas técnicas de germinación y cultivo invitro de Orquideas, que quisieron compartir a través de foros y videos estos conocimientos y sus experiencias, con aciertos y fracasos,  hemos podido aprender diversos métodos para la buena esterilizacion del medio de cultivo.

Incluso en algunas paginas, blog, foros y canales de videos podemos obtener información detallada, de forma mas científica  y desarrollada, sobre la aplicación de métodos de esterilizacion realizados en laboratorios específicos de viveros de Orquideas.




Sobre la forma de realizar el medio de cultivo invitro y la posterior esterilizacion del mismo se ha escrito y se seguirá escribiendo a medida que las formulas vayan mejorándose y los usuarios aficionados apliquen y experimenten sus técnicas.

Hay quien se inclina por la esterilizacion de los frascos mediante la aplicación de altas temperaturas en el horno de cocción, otros en cambio prefieren realizar el proceso mediante tiempos y tandas en microondas.  Se conocen experiencia de esterilizacion mediante la aplicación de vapores de lejía por periodos largos de tiempo. También existe abundante documentación disponible en la red sobre estas técnicas.

Forma de esterilizar.-

Por nuestra parte, el metodo mas sencillo de los que hemos probado y que nos ha dado los mejores resultados,  sigue siendo la cocción en olla a presion.

Para ello, como hemos visto en videos anteriores, con la esterilizacion de otras formulas de medios de cultivo, procederemos, una vez terminada la mezcla y calibrado el ph a 5.7 de acidez, a añadir y disolver el Agar bacteriológico, componente que cambiamos es esta formula junto al carbon activado, con respecto a la formulación descrita en este otro articulo.

microondas

Mediante microondas

Esta operación de calentar y disolver el Agar bacteriológico la podemos realizar calentando el medio al horno o ayudándonos del microondas en varias sesiones de un par de minutos cada una, aplicando potencia baja.

Calentar y agitar por varias veces hasta conseguir la completa disolución del Agar bacteriológico, que en condiciones normales disuelve bastante bien y rápido, sin dejar grumos ni restos apelmazados.

(Procurad siempre que el medio no llegue a hervir, ya que podría perjudicar la consistencia final del mismo)

Una vez lista la mezcla y después de distribuir el contenido en los frascos, mediante un metodo de dosificación,  una jeringa o cualquier otro instrumento, dejar caer las tapas, dejar  sin cerrar del todo y colocar papel aluminio sobre la tapa, procederemos a colocarlos en una olla a presión a la que previamente le habremos incorporado unos centímetros de agua destilada en el fondo, además de alguna plataforma, tapadera  o trapo para evitar el contacto directo de los frascos con el fondo, pueden romperse con el hervido del agua.

(El contenido de los frascos debe estar en torno al centímetro y medio o dos centímetros de espesor de medio en el fondo, según el tamaño de tarro añadir entre  25 Ml  y  50 Ml, con eso será suficiente)

Cerramos, cocinamos durante 20 minutos a máxima presion, esperamos que enfríe y pierda vapor para poder abrir.

Una vez terminado el proceso, cerraremos fuertemente los tarros para que queden sellados, opcionalmente podemos dejar el papel aluminio o colocar film alrededor de las tapas, guardaremos en lugar seco y dejaremos en observación durante un periodo de garantía de  al menos  7 días, para observar que no aparezca contaminación y puedan ser usados para el propósito final de siembra y germinación de semillas o esquejes de Orquideas, todo ello de manera aséptica e invitro.

Os dejo este video de la operación, con la ultima remesa de frascos preparados, espero que os sea de utilidad.

Video:

 


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