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Cultivo InVitro de Semillas de Orquídeas: Método Capsula Verde – Fase II

agosto 11, 2018

Capsula Cattleya

Dedicamos este articulo al procedimiento del cultivo Invitro mediante el metodo de la Capsula Verde.  Con esta practica realizada a unas semillas de Cattleya documentaremos el procedimiento que hemos seguido para su cultivo.

A lo largo del siguiente reportaje podréis observar la técnica empleada, el metodo y los resultados obtenidos hasta el alojamiento de las semillas en los frascos.

Haremos su seguimiento posterior  y os iremos mostrando los avances en el crecimiento y desarrollo de los protocormos, de los frascos y de las plantulas que pretendemos reproducir.

Metodo Capsula Verde

El proceso de siembra de semillas sobre medios de cultivo, desde una Capsula Verde, como hemos comentado en articulos anteriores, requiere la aplicación de cierta técnica y la adopción de medidas higiénicas que nos garanticen un optimo resultado final, lo que nos facilitara una alta tasa de multiplicación, aceptable estabilidad genética y la reproducción de vitroplantas sanas y en condiciones de ser trasplantadas posteriormente a sustrato exvitro.

Aunque la siembra InVitro a nivel de aficionado y de forma casera puede parecer simple, requiere de cierta disciplina y organización, algo de capacitación y ensayo además de una minima cantidad de utiles, herramientas, compuestos y equipo.

Este proceso de siembra Invitro debe ser muy cuidadoso, observando ciertas medidas profilácticas, que comienzan con la limpieza y esterilizacion de las capsulas, vainas o semillas, sin dejar pasar por alto la limpieza y esterilizacion previa de las superficies donde trabajaremos, los frascos, los utiles, las herramientas y el medio de cultivo empleado, como se ha comentado en articulos anteriores, todo ello para conseguir un resultado que nos garantice el éxito de nuestro proyecto.





 

Cuando recolectar la Capsula / Vaina de Orquidea

La capsula de Orquidea deberá ser recolectada en el tiempo adecuado, según cada genero, para que contengan una carga embrionaria suficiente y produzca una germinación satisfactoria, y esto debe ser tenido en cuenta para cada una de las especies que inténtennos cultivar, polinizar, recolectar y sembrar, ya que no todas las capsulas / vainas necesitan el mismo tiempo de maduración en la planta.

 

Lo usual es realizar una recolección cercana al final del periodo de maduración de la capsula / vaina, antes de que alcance el estado dehiscente en la planta, cuando aun está verde pero empieza a presentar tonalidades marrones color chocolate.

 

Siguiendo la tabla/guía que os dejamos a continuación, podréis ver los tiempos necesarios en cada genero, y tener una idea muy aproximada de cuando recolectar, después tocara observar y volver a observar, hasta que comprobemos que la capsula esta a punto y es el momento adecuado de recolectar, en su fecha o al menos en el tramo final del tercer tercio de su tiempo optimo de maduracion:

 

Géneros

Cosecha en días

Aerides especies e híbridos

150-180

Bulbophyllum ​​ (incluido Cirrhopetalum )

140-180

Cattleya Bifoliate Group

110-150

Cattleya flava , cinnabarina , harpophylla

110-120

Cattleya hybrids Labiata Group (amarillo, naranja, colores artísticos)

130-150

Cattleya hybrids Labiata Group (blanco, lavanda, rosa)

150-180

Cattleya hybrids Labiata Group involucra a especies de Sophronitis

130-150

Cattleya xanthina , perrinii , purpurata

120-180

Cattleya coccinea

75-100

Dendrobium bigibbum ( phalaenopsis ) y sus híbridos

120-40

Dendrobium devonianum, lituifolium, anosmum

160-250

Dendrobium nobile y sus híbridos

150-180

Dendrobium stratiotes, superbiens y sus híbridos

150-200

Especie de Ansellia

120-150

Especie de Chysis

140-180

Especie de Oncidium (verdadero)

110-140

Especie de Phaius

120-150

Especie de Rodriguezia

110-130

Especie Maxillaria

120-140

Especie Vandopsis

160-180

Especies de Miltonia (verdad)

120-140

Especies de Ascocentrum e híbridos

110-180

Especies de Brassavola

120-150

Especies de Cyrtopodium

150-270

Especies de Trichocentrum (incluidas​​ Oncidium de cola de rata )

110-130

Especies e híbridos de Epidendrum

100-120

Especies e híbridos de Renanthera

150-180

Especies Broughtonia

60-75

Especies Encyclia e híbridos

130-180

Especies Phalaenopsis e híbridos

110-120

Especies Rhynchostylis e híbridos

150-250

Especies Tolumnia

65-70

Especies Trichocentrum (incluidas​​ Oncidium de oreja de mula )

180-240

Grupo de Bifoliate de los híbridos de Cattleya

110-150

Grupo de Cattleya labiata

130-180

Híbridos de Ascocenda

120-190

Laelia rubescens, anceps

120-150

Psychopsis ​​ especies

90-120

Rhyncholaelia especies

130-180

Trichocentrum microchilum, splendidum

130-170

Vanda especies e híbridos

150-195

 

Como conservar la Capsula / Vaina de Orquidea

Si no se va a realizar la siembra de inmediato, mejor no recolectar y dejar madurar la capsula/vaina en la planta, pero si por alguna razón necesitamos conservar la capsula por algunos días y está ya recolectada, porque nos la han cedido o nos la han enviado,  porque se empezó a abrir en la planta (periodo dehiscente), porque sufrió daños, etc., la mejor forma de conservarla es dentro de un envoltorio de papel de cocina, un sobre de carta o una pequeña caja de cartón o papel. Sera necesario colocarla a la sombra, en lugar ventilado, fresco y seco. También se puede colocar dentro de un frasco hermético, de cristal o plastico e introducir un envoltorio de Silica Gel para evitar la condensación y la humedad y conservar refrigerado, en la zona de verduras de nuestra nevera.

 

Preparar la Capsula / Vaina para el InVitro

Lo primero que debemos hacer, si no la hemos preparado con anterioridad, es cortar y eliminar restos de floración y zonas muertas y secas, después procederemos a lavar a fondo la capsula a procesar, con agua templada y detergente.

Frotar suavemente con un cepillo pequeño (por ejemplo: cepillo dental) por todas las superficies y partes, incluido restos de tallo y zona de la floración.

Una vez lavada y enjuagada reservar en un frasco limpio y esterilizado, cerrar y llevar a la GloveBox.

Agradezco a la usuaria Cati, del foro Infojardin su amabilidad y disposición para el envío de la Capsula, polinizada en una Cattleya de su colección particular.

 

Desinfección y esterilizacion

En este momento deberíamos de tener establecido y ensayado un protocolo de desinfección efectivo.

En mi caso utilizo un metodo de desinfección basado en inmersiones de la capsula en líquidos y soluciones desinfectantes, compatibles con la eliminación de patógenos y hongos, siendo el proceso de la siguiente manera:

 

 

  • Inmersión y agitado en frasco con Alcohol 70º durante un periodo de cinco minutos (5´).
  • Desinfeccion
  • Inmersión y agitado en frasco con Lejía y Agua Destilada  (30% y 70% respectivamente) durante quince minutos (15´)
  • Desinfeccion
  • Inmersión y agitado en frasco con Agua Destilada esterilizada,  primer enjuague  durante un minuto (1´)
  • Enjuague
  • Inmersión y agitado en frasco con Agua Destilada esterilizada,  segundo enjuague  durante un minuto (1´)
  • Enjuague

 

  • Extracción de la capsula / vaina y deposito sobre un plato de trabajo, esterilizado previamente, para proceder al corte, apertura y disección.
  • Tomar pequeñas porciones de semillas con pinzas y distribuir sobre el medio, aplicando pequeños toques con la pinza sobre el borde exterior del frasco para desprender las semillas.
  • Cerrar y precintar con film una vez terminada la siembra en todos los frascos.

 

Datos y fechas: sobre la especie y el medio de cultivo empleado

  1. La capsula procesada proviene del cruce de dos Orquideas Cattleyas.
  2. Fecundación realizada por polinización manual en Octubre de 2017.
  3. Recolectadas el día 27 de Mayo de 2018.
  4. Recibidas el día 31 de Mayo.
  5. Conservadas en refrigeración hasta el momento de la siembra el día 23 de Junio de 2018.

 

 

Las semillas extraídas se siembran en cuatro frascos con la formula variante 4 y dos frascos con  la formula variante 1:

COMPUESTO

Por orden de mezclado

Frascos con​​ 

Formula​​ 

Variante 1

  COMPUESTO

Por orden de mezclado

Frascos con​​ 

Formula​​ 

Variante 4

Aguas destilada

500 ml

Aguas destilada

500 ml

Sacarosa

10 g

 

Sacarosa

10 g

 

Medio MS​​ 

1,105 g

 

Medio MS​​ 

1,105 g

 

 

 

Carbón Activado

1 g

Carbón Vegetal​​ 

1 g

 

 

 

Agua de coco Filtrada

50 ml

 

Agua de coco Filtrada

50 ml

 

Ajustar PH medio a:

5.70

Ajustar PH medio a:

5.70

 

 

Agar Bacteriológico

​​ 3 g

Agar Culinario

5 g

 

 

 

 

 

El medio fue esterilizado en Olla expres y reservado durante un periodo de 10 días antes de sembrar, para su comprobación y descartar una posible contaminacion.

Todos los frascos resultaron viables y sin contaminacion después del periodo de observación y hasta la fecha.

Son revisados semanalmente, se toman fotografías para documentar el progreso y se anotan en cuaderno las incidencias observadas.

 

Notas finales

  • Todo el proceso de siembra,  como se ha descrito,  se realiza dentro de la GloveBox v.1.0
  • El espacio disponible debe ser tenido en cuenta, asi como el numero de tarros a cultivar, por las dificultades y movimiento dentro de la GloveBox v.1.0
  • La apertura de los frascos con medio esterilizado puede resultar dificultosa, por el vacío creado,  recomiendo realizar la operación de apertura provisional antes de empezar la disección de la capsula, al menos aflojar las tapas para aliviar la presión, sin abrir del todo.

Documentación

Adjunto os dejamos un enlace, clic sobre la imagen,  con un documento (Pdf) que describe al completo todo lo que aquí hemos desarrollado, la técnica, recomendaciones, listados y tablas con los medios de cultivo, utiles e instrumentos, formulas, indicaciones sobre el Ph y el procedimiento en forma de practica, detallado paso a paso.

Hemos querido incluir también un presupuesto  desarrollado en base a nuestra propia experiencia de compras y forma de ejecutar el proyecto, con algunos enlaces de aquellos materiales y utiles necesarios (o no tan necesarios).

Este presupuesto os servirá de orientación y deberéis  adaptarlo a vuestras necesidades.

Esperamos que toda la información contenida en este articulo os sirva y anime a todos aquellos que queráis intentar esta experiencia del cultivo invitro de semillas de Orquideas.  Enjoy it !!!

(Documento sujeto a posibles correcciones futuras)

download

Cultivo-Invitro-Semillas-Orquideas

Video

 

 

Esperamos que os gusten y disfrutéis de estas imágenes …


 

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