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Cultivo Invitro esquejes de vara floral de Phalaenopsis

septiembre 14, 2018

GloveBox v.1.9

Una de las formas para intentar reproducir una planta de Orquideas Phalaenopsis es por medio de la siembra de esquejes, y la mejor manera de hacerlo es mediante el procedimiento de cultivo InVitro.

No todos los géneros de Orquideas admiten este sistema de reproducción vegetativa mediante la siembra InVitro de esquejes de la vara floral.

Si bien sabemos que el tejido vegetal de la vara floral es viable de reproducción por esquejes, o estimulado para la generación de keikis,  el género mas usado para estos fines y del que se obtienen los mejores resultados es el de la Orquidea Phalaenopsis.

Elegir el momento de la siembra

El proceso se debe realizar después de la caída de la ultima flor de la vara floral. Una vez tengamos esta sin flores, la cortaremos de la planta y la seccionaremos en trozos o porciones.

Estos esquejes deben cumplir algunas normas establecidas y comprobadas para tener éxito en nuestro experimento:

El proceso se inicia en el momento de cortar la vara floral, que si no vamos a cultivar de inmediato es mejor mantener unida a la planta, de lo contrario no nos servirá, ya que una vez cortada en poco tiempo se secara.

En este sentido, debemos indicar que tampoco tendremos mucho tiempo para decidir que hacer con la vara una vez perdidas las flores.

Aunque será la propia Orquidea, por su cuenta,  la que decidirá que hacer con la vara, lo mas normal es que empiece a secarse antes de lo esperado.

Pero, si no es intención de la planta secar la vara de inmediato, tendremos algo mas de tiempo, aunque esto no lo sabremos con certeza.

En ese caso,  que la Orquidea decida mantener la vara, puede que vuelva a brotar mas adelante, como una nueva sub-vara, o que tengamos la enorme suerte de contemplar como de uno de esos brotes se nos proporciona un keiki o hijo idéntico genéticamente a la planta madre.

En este caso, será un acierto no haber realizado esta practica…

El consejo, si no se quiere dejar que la Orquidea decida que hará con ella, o si no pretendemos su reproducción mediante keiki inducido, es mejor realizar una poda de la misma, para descargar a la planta de la carga que supone mantener ese tejido, e intentar hacer una copia de seguridad de nuestra planta.

La reproducción de keikis de forma espontánea no es muy habitual, y se deben de dar unas condiciones muy determinadas.

Desinfección de herramientas y corte de la vara floral

Lógicamente y como era de suponer, debemos tener especial cuidado en la desinfección de las herramientas de corte y manipulación del tejido vegetal que vamos a obtener, ya que cualquier contaminacion que se produzca en los cortes afectara no solamente al experimento de siembra sino también a la propia planta que sufrirá sus efectos negativos.

El fin de esta practica es reproducir por medio de esquejes tantas plantulas como se puedan a partir de la los nudos de la vara floral, que una vez desarrolladas serán copias exactas genéticamente de la planta madre.

El corte en la vara floral se realizara por encima de uno o dos nudos contando desde la base de la planta, dejando por encima del ultimo un trozo de al menos 1 centímetro, lo que evitara que el trozo de vara en la planta termine secándose mas de lo necesario.

Realizaremos el corte con una herramienta bien afilada, limpia, desinfectada y a ser posible esterilizada. No esta de mas proceder a su flameado mediante una llama o alcohol. Deja enfriar unos minutos la herramienta, protegida con papel aluminio, antes de proceder al corte.

Una buena opción es usar una tijeras mientras se sujeta la vara, una vez separada de los tutores.

Sobre el mismo, aplicaremos mediante palillos estériles, un poco de canela en polvo para su sellado y prevención de enfermedades o la aparición hongos, aprovechando las propiedades fungicidas y bactericidas de esta.

Preparando la vara y sus secciones

En la segunda parte del proceso realizaremos un lavado con agua y detergente, frotando suavemente la vara floral, para eliminar restos de tejido muerto, seco, posibles insectos o restos de sustratos. 

Depositaremos en una superficie de trabajo que previamente habremos desinfectado y esterilizado y procederemos en ella al corte de tantas secciones como se puedan entre nudo y nudo.

La sección debe tener al menos un nudo, y el corte un centímetro de tallo por encima del nudo, en su posición natural en la vara, y dos centímetros de tallo por la parte inferior desde el nudo.

Este corte lo realizaremos en ángulo…

Estos cortes de las secciones que obtendremos de la vara floral, se realizaran con una herramienta bien afilada, que corte de forma eficiente evitando aplastamientos o roturas del tejido vegetal, y por supuesto, limpia, desinfectada, esterilizada y flameada.

Para el caso usamos un bisturí con cuchilla estéril…

Se quitará con cuidado la piel que cubre cada nudo de cada esqueje o sección, para favorecer el nuevo brote. 

Exudaciones fenólicas.

Depositaremos las secciones de esquejes en una solución de agua destilada esterilizada a la que habremos añadido dos o tres gotas de agua oxigenada durante un tiempo de una hora, en un tarro tapado y en lugar fresco.

Esto es opcional, aunque recomiendo su empleo, ya que de esta forma parece que se retrasa o se evita en parte la aparición de exudaciones fenólicas durante el proceso de germinación y crecimiento de las plantulas.

Durante el tiempo de reposo de lo esquejes, prepararemos todo lo necesario dentro de la Glovebox v.1.9, que previamente habremos lavado y desinfectado.

Siembra en medio de cultivo: Invitro

Además de esto, con antelación, se habrán preparado los frascos con el medio de cultivo para la siembra, dejando su correspondiente periodo de seguridad y maduración, para la comprobación y observación de posibles, aunque no deseables, síntomas de contaminación.

En la Glovebox v.1.9 introduciremos los agentes desinfectantes que usaremos, además de los frascos con agua destilada y medio de cultivo, utiles necesarios y herramientas que se vayan a usar en el proceso de la siembra, y que podrían ser los siguientes:

  • 1 Cubeta de decantación, para desechar líquidos usados.
  • Pinzas, herramientas de corte, soportes, plato de trabajo, etc.
  • 1 Frasco con lejía pura para vaporización.
  • 1 Frasco con desinfectante para depositar instrumentos. 
  • 2 o 3 frascos con agua destilada estéril para enjuagues.
  • Alcohol 70º: Pulverizar en manos y sumergir esquejes.
  • Agua Oxigenada: sumergir esquejes.
  • Solución de lejía al 15%: sumergir esquejes.
  • Frascos con medio de cultivo.

El frasco con los esquejes, que vaciaremos de liquido en el momento de iniciar el proceso de lavado y desinfección, dentro de la Glovebox.

Proceso de desinfección
Enjuague
Proceso de enjuague 1
Enjuague
Proceso de enjuague 2
Proceso de enjuague 3

1.- Aplicación de un lavado de los esquejes, de forma muy rápida en alcohol 70º  puro, sin diluir, durante 30 segundos, vertiendo en el frasco y aplicando ligeros movimientos circulares, a continuación vaciaremos el contenido de alcohol en la cubeta de decantación y procederemos a realizar tres enjuagues seguidos con un poco de agua destilada estéril, durante un minuto en cada enjuague.

Enjuague
Proceso de enjuague 1
Enjuague
Proceso de enjuague 2

2.- Aplicación de un lavado de los esquejes,  en agua oxigenada pura, sin diluir, la comercial al 3% o 5%,   durante 4 minutos, vertiendo en el frasco y aplicando ligeros movimientos circulares, a continuación vaciaremos el contenido de agua oxigenada en la cubeta de decantación y procederemos a realizar dos enjuagues seguidos con un poco de agua destilada estéril, durante un minuto en cada enjuague.

Enjuague
Proceso de enjuague 1
Enjuague
Proceso de enjuague 2
Proceso de enjuague 3

3.- Aplicación de un lavado de los esquejes,  en solución de lejía comercial, diluida al 15% en agua destilada estéril,  durante 9 minutos, vertiendo en el frasco y aplicando ligeros movimientos circulares, a continuación vaciaremos el contenido de solución de lejía en la cubeta de decantación, poco a poco, ya que reaccionara con el agua oxigenada y provocara algo de espuma,  procederemos a realizar tres enjuagues seguidos con un poco de agua destilada estéril, durante un minuto en cada enjuague.

4.- Como ultimo paso procederemos a la extracción de los esquejes y la colocación de los mismos en el frasco con el medio de cultivo.

Los esquejes pueden ser depositados sobre el medio de cultivo o clavados en el mismo, por la parte que cortamos en angulo.

El numero de esquejes a sembrar variara en función del tamaño del frasco y de nuestras pretensiones, lo habitual es sembrar uno o dos esquejes por frasco.

Debemos contar,  seguramente, con la aparición de exudaciones fenólicas procedente de los esquejes. Esta irá depositando en el medio de cultivo poco a poco y lo ira cambiando de color, volviéndolo mas oscuro, lo que nos obligara a trasladar los brotes a nuevo medio de cultivo en unos meses.

La aparición de posible contaminacion por errores o fallos en el procedimiento harán inviable el cultivo, razón por la que no debemos poner todo el material en el mismo frasco.

El medio de cultivo empleado esta basado en la misma formula y proporciones que uso para la siembra de semillas y que podéis ver con detalle en el articulo dedicado a Medios de Cultivo.

Los tiempos empleados para la desinfección, asi como las proporciones y  mezclas en los líquidos quedan aquí reflejados con carácter meramente orientativo.

Puedes experimentar y variar los tiempos y las proporciones usadas si lo  consideras oportuno, teniendo en cuenta que:

  • El metodo, las mezclas y los tiempos de exposición  empleados en este articulo están basados en los usos mas habituales entre los aficionados al cultivo invitro de varas de Orquideas Phalaenopsis, pero aun asi,  estudia las circunstancias de tu cultivo y usa para ello el metodo, las mezclas y los tiempos de exposición que consideres oportunos.
  • A mayor tiempo, y/o mayores  proporciones de líquidos desinfectantes, el tejido vegetal estará mas expuesto y puede que su deterioro sea irreversible, haciendo inviable la practica.
  • A menor tiempo y/o menores proporciones se disminuyen las garantías de una correcta desinfección, lo que podría dar lugar a la aparición de contaminacion por bacterias, hongos, levaduras, etc., haciendo inviable la practica.
  • Tendrás que tener en cuenta también otros factores como el tamaño y calibre de la vara y las secciones a sembrar, la temperatura ambiente en el momento de la siembra, el tipo de medio usado, etc.
  • Te invitamos a que compartas con nosotros todo lo que experimentes a través de los comentarios de este sitio, te de buen resultado o no.

Para terminar este articulo, te dejamos un video con todo el proceso de manera detallada.

Video:

Cultivo Invitro Esqueje de Vara Floral Phalaenopsis

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Orquídeas, Cactus, Suculentas, Carnívoras o Lithops

 

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