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Como cultivar Semillas de Orquideas Invitro- Método de la Jeringuilla – Fase I

febrero 13, 2019

Como cultivar de forma invitro las semillas de Orquídeas mediante el metodo de la jeringuilla.

El ultimo cultivo invitro de semillas de Orquídeas de la temporada 2018 se convirtió en el primer cultivo invitro de semillas de Orquídeas de la temporada 2019.

Cultivo Invitro Orquídeas

Es decir, algunos problemas en mi logística hicieron que no pudiera tener a tiempo todo lo necesario.

Por otro lado, estaba esperando recibir algunas semillas que me habían sido enviadas.

Desde Florida-USA, Antonio Corbeira, al que le agradezco su amabilidad y disposición.


Antonio Corbeira, usuario del foro Infojardin

También tuve algún retraso en completar el pedido que le hice a Orquídeas Almería, al que también agradezco el trato recibido, las facilidades dadas, y las semillas que me envió.

Además de eso quería probar los cierres para frascos tipo Phyto-Cap, por lo que no me importo esperar unos días a tenerlos disponibles.

Use también algunos frascos pequeños de 15 ml, con tapa de polipropileno sin rosca.

Finalmente, con todo preparado me dispuse a la fabricación y enfrascado del medio de cultivo.

Después de unos días de curado y observación estaba listo para ser usado el día 13 de Enero de 2019.

La Formula para el Medio.-

Para la preparación del instrumental, utiles y frascos se empleó el método habitual.

El medio de cultivo y su posterior esterilización fue realizada como en cultivos anteriores.

Podéis seguir los articulos a través este enlace sobre: Medios de Cultivo, donde encontrareis más información.

Los cambios en la fórmula para esta ocasión, a la que llamaremos «Variante 5», fueron los siguientes:

– Sustituir el agua de coco natural embotellada por agua de coco natural en su propio coco.

Si lo podeis encontrar en el mercado es una buena opción.

– Concentrado de Vitamina B1.

– Concentrado de Complejo Vitamínico con minerales

Preparar los Concentrados de B1 y Complejo Vitamínico y Minerales

– En un frasco limpio y esterilizado vierta  agua destilada templada, aproximadamente  30 ml. 

– Añádale un comprimido  de Vitamina B1, (Tiamina, Benerva 300 mg) sin recubrimiento.

– Añádale un comprimido  de Complejo Vitamínico, sin recubrimiento.

  (También se puede realizar la mezcla por separado).

Si usa capsulas, deseche los envoltorios de ambos.

Seguidamente, reserve ese Concentrado.

Debe evitarse la luz sobre el Concentrado después de realizarlo, cubra el frasco con papel de aluminio o similar. (Realice el Concentrado unas hora antes, pero no más de 24 horas antes)

Del mismo modo el resto de ingredientes quedaron como de forma habitual, siendo la composición final la siguiente:

MEDIO DE CULTIVO EXPERIMENTADO​​ 

COMPUESTO

Por orden de mezclado

Dosificación

Aguas destilada

1000 ml

Azúcar - Sacarosa

20 g

Medio MS​​ 

2,21 g

Tiamina B1

(Previamente disuelta en 50 ml destilada)

300 mg

Complejo vitamínico con minerales ​​ 

(Previamente disuelta en 50 ml destilada)

1 Capsula

Carbón Activado

2 g

Agua de coco Natural Filtrada

100 ml

Ajustar PH medio a:

5.70

Agar Bacteriológico

5 g

 


Las especies de Orquídeas cultivadas Invitro.-

Por cortesía de Antonio Corbeira:

  • Blc. Hsinying Caterine «Dogashina» x C.Lueddemaniana
  • Lc. Roebeling Sentinel

Por cortesía de Orquídeas Almería:

  • Psychopsis papilio
  • Cattleya Violacea
  • Laelia Anceps

Por cortesía de Cati:

Brassavola Nodosa

Chysis Bractescens


Como resultado se prepararon varios frascos con medio de cultivo para cada especie, de distintos formatos donde fueron depositadas las semillas después de la desinfección.

Desinfección de Semillas – Método de la Jeringuilla

Lo mas importante para el cultivo invitro es la esterilización del frasco con el medio y el correcto desinfectado de las semillas.

En consecuencia para la desinfección de las semillas mediante el método de la jeringuilla se ha utilizado Agua Oxigenada de 110 volúmenes a una disolución del 30 %.

El tiempo empleado mediante agitación de las semillas ha sido de 10 minutos y todo el proceso se ha realizado en completa oscuridad.

El Agua Oxigenada de 110 volúmenes es foto-sensible, por lo que reacciona al ser expuesta a una fuente lumínica de intensidad, descomponiéndose en oxígeno y agua destilada.

Por ese motivo, tanto la manipulación, la mezcla y disolución, el llenado de jeringuillas y el posterior desinfectado de las semillas se debe realizar en completa oscuridad.

Para asegurarnos que no entre luz, es conveniente enfundar bien las jeringuillas en papel de aluminio, antes del proceso, procurando que todas las superficies queden tapadas.

Seguridad en la manipulación.-

Debemos observar también algunas medidas de seguridad en la manipulación del Agua Oxigenada 110 volúmenes.

Decolora la piel sana.

Puede llegar a ser irritante.

Quema en caso de pequeñas heridas.

En contacto con ojos o mucosas puede producir graves lesiones.

Por todo ello se recomienda el uso de guantes desechables, mascarillas y gafas de protección durante el proceso de manipulación, mezcla y desinfección de las semillas.

Preparacion del Cultivo.-

Una vez realizada la mezcla al 30 % de Agua Oxigenada 110v y 70% de Agua Destilada Esterilizada, se preparan las jeringuillas.

Primero deberas taponar con un poco de algodón el extremo donde se sitúa la aguja.

Cargar con una porción de semillas, según necesidades de la siembra y del número de frascos a usar por cada especie.

Posteriormente se comienza succionando uno o dos ml de la disolución de Agua Oxigenada, según tamaño de la jeringuilla.

A continuación agitar el contenido vigorosamente durante 10 minutos para que todo el material vegetal quede expuesto a la acción desinfectante.

Después de eso desprender el papel de aluminio en el que hemos envuelto la jeringuilla.

Finalmente se expone a una fuente lumínica intensa durante otros 10 minutos para que el Agua Oxigenada se descomponga.

Trabajar en la GloveBox

Para terminar una vez realizado el procedimiento de desinfección solo nos queda llevar el material de cultivo a la GloveBox 2.0 .

A continuación y antes de realizar la siembra en cada frasco podemos desechar un poco del agua que nos quedara en la jeringuilla.

Para resumir, solo es necesario un poco de liquido para repartir en cada frasco.

Así que, agitamos y ponemos en posición vertical la jeringuilla, empujamos el émbolo y decantamos en algún recipiente el liquido sobrante.

A continuación, retiramos el tapón de algodón de la parte de salida de la jeringuilla y soltamos algo de líquido en cada frasco.

Recordad agitar bien antes de depositar en los frascos, para que las semillas viajen con el líquido.

Notas finales:

(13/01/2019 Fecha de Cultivo) – Después de realizada la siembra solo queda esperar, al menos dos meses, para empezar a ver resultados.

Por otro lado los frascos fueron depositados en una cámara de cultivo, fotoperiodo de 16 horas mediante lampara led de crecimiento, con temperatura en torno a 25 grados.

(13/02/2019 – Evolución del Cultivo) – En el momento de la redacción y publicación de este artículo, había transcurrido un mes desde la siembra, sin cambios aparentes.

– Fueron cultivados en una primera fase 14 frascos, dos por cada especie, de los que ninguno presento signos de contaminación.

Video.-

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